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CCK-8

CCK-8
访问量 : 125
编辑时间 : 2019-06-04

概述:

    CCK-8(Cell Count Kit-8)是一种利用WST-8(2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)快速检测细胞增殖或毒性试验的方法。WST-8是一种类似MTT的四唑盐,在电子载体的存在下,被活细胞内的脱氢酶还原生成水溶性的橙黄色Formazan(甲臜),通过比色法检测甲臜生成量来反映试验中活细胞的数量。

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图.1.  CCK-8化学原理示意图

操作方法:

1. 标准曲线制作

  a. 接种细胞:接种不同细胞密度梯度的细胞至96孔板(建议设5 ~ 8个梯度),每孔100 μl,每组设置3~5个复孔,置于37℃,5% CO2培养箱;

  b. CCK-8孵育:接种4 h后,待细胞完全贴壁,在每孔中加入10 μl的CCK-8试剂,轻轻混匀,并将培养板置于37℃,5% CO2培养箱中孵育1~4 h;

  c. 上机检测:将孵育后的细胞培养板置于酶标仪上,在450 nm处检测其吸光值;

  d. 制作标曲:制作以细胞数量为横坐标,OD值为纵坐标的标准曲线,参照标准曲线可以计算出样品组的细胞数量;

2. 细胞毒性检测

  a. 接种细胞:接种对数期的细胞至96孔板,密度约1~5×103个/孔,每孔100 μl,每组设置3~5个复孔,置于37℃,5% CO2培养箱;

  b. 样品处理:待细胞贴壁后,加入不用浓度的药物或样品处理细胞,然后置于培养箱中孵育一定的时间(如:24 h、48 h、72 h);

  c. CCK-8孵育:每孔加入10 μl的CCK-8试剂,轻轻混匀,并将培养板置于37℃,5% CO2培养箱中孵育1~4 h;(可进行预实验确定孵育时间);

  d. 上机检测:将孵育后的细胞培养板置于酶标仪上,在450 nm处检测其吸光值;

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图.2. 以Hela细胞为例,细胞按1.25×103 ~ 20×103个/孔的密度梯度接种至96孔板中,培养4 h后,待细胞完全贴壁,每孔加入10 μl的CCK-8试剂,轻轻混匀,置于培养箱中孵育1 h后,在450 nm处检测其吸光值,并制作标准曲线。


包装规格

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注意事项:

1. 接种对数期生长的细胞,注意使细胞分散均匀,确保每个复孔中的细胞数量一致,减少误差。

2. 为了达到好的实验效果,建议先进行预实验,确定好的细胞接种密度及CCK-8试剂孵育时间;以贴壁细胞为例,接种密度约1~5×103个/孔;孵育时间为1~4 h,多数细胞孵育约30 min即可观察到明显的颜色变化。

3. 设置空白对照,在无细胞的培养基中加入CCK-8检测,去除本底对吸光值的干扰。

4. 如果OD值太高,建议降低细胞接种密度或减少CCK-8试剂孵育时间。


储存条件

4℃保存,1年有效;-20℃保存,2年以上有效; 

仅供科学研究使用