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细胞转染

细胞转染
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编辑时间 : 2019-06-04

产品概述

    本产品是一种具有高效转染、低毒性的阳离子聚合物核酸转染试剂,适用于大多数的真核细胞,可以用于原代细胞和悬浮细胞体外转染。本品为经过优化的纳米材料,它不仅改善了转染试剂存在细胞毒性的问题,对于大多数细胞,转染72小时后不更换培养基无明显毒性;同时在血清存在的条件下,也能达到高效的转染效果。

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操作步骤

(以24孔板为例,如使用其它规格培养板/皿,请参照转染试剂建议使用剂量标准进行调整。为了获得好的转染效果,请根据实验优化使用剂量)

1. 接种细胞

贴壁细胞:转染前一天,接种适量细胞(0.5 ~ 2×105)接种至500 μl不含抗生素的培养基中,使转染时细胞密度达到70 ~ 80%汇合度。

悬浮细胞:转染前,接种4~ 8×105个/孔于500 μl不含抗生素的培养基中。

2. 转染复合物配制(以24孔板每孔用量为参考)

a. 取0.8 μg质粒DNA稀释于50 μl无血清培养基中,轻轻吹吸混匀;

b. 取2 μl转染试剂稀释于50 μl无血清培养基中,充分混匀,室温条件下孵育5分钟;

c. 将a和b稀释的质粒和转染试剂混合,充分混匀(可涡旋振荡),室温条件下孵育20分钟;

3. 转染细胞:将孵育20分钟后的转染复合物以100 μl/孔加入24孔板的细胞中,轻轻摇匀。

4. 将细胞置于培养箱中培养18 ~ 48小时后检测细胞转染结果,此过程中可以不更换含转染复合物的培养基(对于敏感细胞建议在4 ~ 6小时后更换培养基)。


储存条件

4℃保存,1年有效;-20℃保存,2年以上有效;反复冻融不影响试剂的质量。

仅供科学研究使用

产品规格

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优化转染

    为了获得好的的转染效果,降低其它因素的影响,需要根据具体实验情况,调整细胞接种密度、转染试剂/质粒DNA剂量来优化转染条件。敏感细胞可适当提高接种密度,确保细胞维持较高的增殖能力;转染试剂/质粒DNA剂量比例可在1:1至1:5之间调整。


转染试剂建议使用剂量

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(为了获得好的转染效果,请根据实验优化使用剂量)


注意事项

a.转染前必须确保细胞处于良好的生长状态;

b.为避免细胞出现死亡,培养基中尽量不要添加抗生素;

c.使用高纯度的质粒确保高效的转染效率;

d.使用前充分摇匀转染试剂(或涡旋振荡),使转染试剂分布均匀;

e.质粒和转染试剂稀释时,请使用无血清无抗生素的培养基(有条件可以使用Opti-MEM低血清培养基);